失眠是一種十分普遍的疾病，在睡眠障礙中受到 主要的關(guān)注，失眠患者的主要表現(xiàn)有入睡困難、睡眠 質(zhì)量下降和睡眠時(shí)間減少等表現(xiàn) 。不僅如此，長(zhǎng)期失 眠還可以造成記憶功能下降、注意功能下降、計(jì)劃功 能下降，從而導(dǎo)致白天困倦，工作能力降低，在停止工 作時(shí)容易出現(xiàn)日間嗜睡現(xiàn)象。

一、實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

動(dòng)物由長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 技 術(shù) 有 限 責(zé) 任 公 司 （動(dòng) 物 許 可 證 號(hào) ：SCXK （吉） - 2016- 0003，序號(hào)201900026508） 提供，wistar大鼠30 只，體重200—220g。實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)針灸 經(jīng)絡(luò)研究所。

2.飼養(yǎng)環(huán)境

室內(nèi)溫度控制在20℃—22℃，相對(duì)濕 度45%—65%，自然光，避免噪聲和其他干擾。將30只 大鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，大鼠自由進(jìn)食飼料和水，墊料 保持干燥，7天后稱(chēng)量體重。普通飼料按國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 飼養(yǎng)成分統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)配置 。

二、實(shí)驗(yàn)分組

大鼠正常喂養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分組，分為模型 組、藥物組、推拿組，每組大鼠按自然序號(hào)進(jìn)行標(biāo)記， 采用熒光涂抹技術(shù)，在大鼠身上用黃色熒光筆進(jìn)行標(biāo)記。

三、實(shí)驗(yàn)藥物與設(shè)備

（一）實(shí)驗(yàn)藥物 對(duì)苯丙氨酸 （PCPA），美國(guó)Sigma公司，CAS NO. 742400- 2。人參歸脾丸，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，批 號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20010033。配水為湯。戊巴比妥鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：WS20130601。p物質(zhì) 試劑盒：南京建成生物工程研究所，p物質(zhì)凍干粉，批 號(hào)：KIT2019012。β內(nèi)啡肽試劑盒：南京建成生物工程 研究所，β內(nèi)啡肽凍干粉，批號(hào)：KIT2019016。
（二）實(shí)驗(yàn)儀器 上海精密科學(xué)儀器有限公司JY10001電子秤；賽 多利斯科學(xué)儀器北京有限公司BSA124S- CW精密電子 秤；酶標(biāo)儀：伯騰酶標(biāo)儀BIOTek- SMAT；恒溫水浴箱： 精宏DK-S22。

四、實(shí)驗(yàn)方法

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的失眠造模 30只大鼠同時(shí)進(jìn)行失眠造模，造模采用腹腔注射 PCPA混懸液，連續(xù)注射2天，RCPA臨用 前 按 大 鼠 100mg/kg用量，用弱堿性生理鹽水配置成混懸液備用， 第一次腹腔注射36小時(shí)后，大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律缺失， 白天與夜晚皆活動(dòng)不斷，造模大鼠腹腔注射戊巴比妥 30mg/Kg（預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)得引起100%大鼠睡眠的最小劑 量）。提起大鼠尾巴，將大鼠腹部朝上放在墊塊上記 錄大鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間，以翻正反射消 失為發(fā)生睡眠。以翻正反射，提示造模成功。
（二）實(shí)驗(yàn)方法 1.模型組：每天按照正常標(biāo)準(zhǔn)喂食、喂水。 2.藥物組：每天按照人∶大鼠=1∶30的比例，對(duì)藥 物組大鼠灌胃按體重轉(zhuǎn)毫升數(shù)。 3.推拿組：取穴及部位：中脘、神闕、中極，腹部。手 法：摩法、振法。以爽身粉為推拿介質(zhì)，以臍為中心順 時(shí)針掌摩全腹5分鐘，以調(diào)暢氣機(jī)；雙手指腹加團(tuán)揉全腹10分鐘，以調(diào)臟通腑、平衡陰陽(yáng)；單掌按振中脘穴 2分鐘，單掌掌振神闕穴3分鐘，單掌閃振中極穴5分 鐘，以健脾和胃，補(bǔ)益氣血；隨呼吸掌按腹部，以神闕 穴為中心，吸氣時(shí)深按，吐氣時(shí)輕抬，時(shí)間5分鐘，以引 氣歸元，寧心安神。

五、觀測(cè)指標(biāo)

1.p物質(zhì)。ELISA檢測(cè)法：腹腔靜脈取血5ml，分離 血清，用鼠p物質(zhì)ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清p物質(zhì)的 濃度，嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行操作。于波長(zhǎng)450nm的酶儀上讀取各孔的OD值。 2.β內(nèi)腓肽。ELISA檢測(cè)法：腹腔靜脈取血5ml，分離 血清，采用β內(nèi)啡肽ELISA試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒要求 進(jìn)行操作。于波長(zhǎng)450nm的酶儀上讀取各孔的OD值。

六、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)分析擬采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。 ELISA數(shù)值計(jì)算，采用ELISAAcalc進(jìn)行計(jì)算。數(shù)據(jù)采用 成組T檢驗(yàn)，進(jìn)行兩兩對(duì)比分析。

七、結(jié)果（見(jiàn)下表）


八、討論

失眠是一種十分普遍的生理心理疾病，有報(bào)道稱(chēng) 全球約一半的成年人受到慢性失眠的影響。長(zhǎng)期失眠 不僅可以造成免疫力下降、內(nèi)分泌紊亂、心功能下降 等軀體機(jī)能的損傷，還會(huì)引起焦慮、注意力下降等心 理功能的紊亂，本項(xiàng)目是通過(guò)振腹推拿的方法研究對(duì) 失眠大鼠的影響，旨在運(yùn)用推拿手法幫助解決現(xiàn)在社 會(huì)上因生理、心理等原因引起的失眠問(wèn)題，對(duì)于提高 護(hù)理的保健意識(shí)和社會(huì)保健意識(shí)有積極的意義。提高 失眠患者對(duì)于自身失眠狀態(tài)的認(rèn)識(shí)和重視程度，加強(qiáng)自我保健意識(shí)，幫助解決現(xiàn)在社會(huì)上因生理、心理等 原因引起的失眠問(wèn)題。推拿手法屬于中醫(yī)特色，對(duì)身 體沒(méi)有傷害，屬于保健類(lèi)的治療方法，和藥物治療相 比，安全性較高，無(wú)副作用。通過(guò)本研究探討推拿和失 眠的關(guān)系及對(duì)失眠大鼠睡眠的改善情況，為臨床治療 失眠提供了相關(guān)依據(jù)。腹部推拿可以提高失眠大鼠的 p物質(zhì)和β內(nèi)啡肽水平，對(duì)腦組織及晝夜節(jié)律變化有 較好的輔助作用。

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